(Поточна цитометрия, FCM) е клетъчен анализатор, който измерва интензитета на флуоресценция на оцветени клетъчни маркери. Това е високотехнологична технология, разработена на базата на анализа и сортирането на единични клетки. Тя може бързо да измери и класифицира размера, вътрешната структура, ДНК, РНК, протеини, антигени и други физични или химични свойства на клетките и може да се основава на събирането на тези класификации.
Флоуцитометърът се състои главно от следните пет части:
1 Проточна камера и флуидна система
2 Лазерен източник на светлина и система за оформяне на лъча
3 Оптична система
4 Електроника, система за съхранение, показване и анализ
5 Система за сортиране на клетки
Сред тях, лазерното възбуждане в лазерния светлинен източник и системата за формиране на лъча е основното измерване на флуоресцентните сигнали в поточната цитометрия. Интензитетът на възбуждащата светлина и времето на експозиция са свързани с интензитета на флуоресцентния сигнал. Лазерът е кохерентен светлинен източник, който може да осигури осветление с една дължина на вълната, висок интензитет и висока стабилност. Той е идеалният източник на възбуждаща светлина, който отговаря на тези изисквания.
Между лазерния източник и проточната камера има две цилиндрични лещи. Тези лещи фокусират лазерен лъч с кръгло напречно сечение, излъчван от лазерния източник, в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение (22 μm × 66 μm). Лазерната енергия в този елиптичен лъч се разпределя съгласно нормално разпределение, осигурявайки постоянен интензитет на осветяване на клетките, преминаващи през зоната на лазерно детектиране. От друга страна, оптичната система се състои от множество комплекти лещи, отвори и филтри, които могат да бъдат грубо разделени на две групи: преди и след проточната камера.
Оптичната система пред проточната камера се състои от леща и отвор. Основната функция на лещата и отвора (обикновено две лещи и отвор) е да фокусират лазерния лъч с кръгло напречно сечение, излъчван от лазерния източник, в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение. Това разпределя лазерната енергия според нормално разпределение, осигурявайки постоянен интензитет на осветяване на клетките в зоната на лазерно детектиране и минимизирайки смущенията от разсеяна светлина.
Има три основни вида филтри:
1: Дългопропускащ филтър (LPF) - пропуска само светлина с дължини на вълните по-високи от определена стойност.
2: Късопропускащ филтър (SPF) - пропуска само светлина с дължини на вълните под определена стойност.
3: Лентов филтър (BPF) - пропуска само светлина в определен диапазон на дължината на вълната.
Различни комбинации от филтри могат да насочват флуоресцентни сигнали с различни дължини на вълната към отделни фотоумножителни тръби (ФЕУ). Например, филтрите за откриване на зелена флуоресценция (FITC) пред ФЕУ са LPF550 и BPF525. Филтрите, използвани за откриване на оранжево-червена флуоресценция (PE) пред ФЕУ, са LPF600 и BPF575. Филтрите за откриване на червена флуоресценция (CY5) пред ФЕУ са LPF650 и BPF675.
Флоуцитометрията се използва главно за сортиране на клетки. С напредъка на компютърните технологии, развитието на имунологията и изобретяването на технологията с моноклонални антитела, нейните приложения в биологията, медицината, фармацията и други области стават все по-широко разпространени. Тези приложения включват анализ на клетъчната динамика, клетъчна апоптоза, клетъчно типизиране, диагностика на тумори, анализ на ефикасността на лекарствата и др.
Време на публикуване: 21 септември 2023 г.
