(Проточна цитометрия, FCM) е клетъчен анализатор, който измерва интензитета на флуоресценция на оцветените клетъчни маркери. Това е високотехнологична технология, разработена въз основа на анализа и сортирането на единични клетки. Той може бързо да измери и класифицира размера, вътрешната структура, ДНК, РНК, протеините, антигените и други физически или химични свойства на клетките и може да се основава на събирането на тези класификации.
Цитометърът на проблясъка се състои главно от следните пет части:
1 система за камера и флуида на потока
2 Лазерен източник на светлина и система за оформяне на гредата
3 Оптична система
4 Електроника, система за съхранение, показване и анализ
5 Система за сортиране на клетки
Сред тях лазерното възбуждане в лазерния източник на светлина и системата за формиране на лъча е основното измерване на флуоресцентните сигнали в проточната цитометрия. Интензивността на светлината на възбуждане и времето на експозиция са свързани с интензивността на флуоресцентния сигнал. Лазерът е кохерентен източник на светлина, който може да осигури осветеност с дължина на една вълна, висока интензивност и висока стабилност. Той е идеалният източник на възбуждане за изпълнение на тези изисквания.
Между лазерния източник и поточната камера има две цилиндрични лещи. Тези лещи фокусират лазерен лъч с кръгло напречно сечение, излъчвано от лазерния източник, в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение (22 µm × 66 μm). Лазерната енергия в рамките на този елиптичен лъч се разпределя според нормалното разпределение, като се гарантира постоянна интензивност на осветяването на клетките, преминаващи през областта на откриване на лазер. От друга страна, оптичната система се състои от множество набори от лещи, щифтове и филтри, които могат да бъдат разделени грубо на две групи: нагоре и надолу по течението на поточната камера.
Оптичната система пред камерата на потока се състои от обектив и въртене. Основната функция на обектива и върха (обикновено две лещи и пинче) е да се съсредоточи лазерния лъч с кръгло напречно сечение, излъчвано от лазерния източник в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение. Това разпределя лазерната енергия според нормалното разпределение, като гарантира постоянна интензивност на осветяването на клетките в областта на откриване на лазер и минимизиране на смущения от бездомната светлина.
Има три основни типа филтри:
1: Дълго пропускателен филтър (LPF) - позволява само светлина с дължини на вълната, по -висока от конкретна стойност, през която да премине.
2: Филтър с къси проходи (SPF) - Позволява само светлина с дължини на вълната под определена стойност, през която да премине.
3: Bandpass Filter (BPF) - Позволява само светлина в определен диапазон на дължината на вълната, през който да премине.
Различните комбинации от филтри могат да насочват флуоресцентни сигнали при различни дължини на вълната към отделните фотоумнопилни тръби (PMTs). Например, филтрите за откриване на зелена флуоресценция (FITC) пред PMT са LPF550 и BPF525. Филтрите, използвани за откриване на оранжево-червена флуоресценция (PE) пред PMT, са LPF600 и BPF575. Филтрите за откриване на червена флуоресценция (CY5) пред PMT са LPF650 и BPF675.
Проточната цитометрия се използва главно за сортиране на клетки. С развитието на компютърните технологии, развитието на имунологията и изобретяването на технологията на моноклонални антитела, нейните приложения в биологията, медицината, фармацията и други области стават все по -широко разпространени. Тези приложения включват анализ на клетъчната динамика, клетъчна апоптоза, типиране на клетки, диагностика на тумора, анализ на ефикасността на лекарството и др.
Време за публикация: септември-21-2023
