(Flow cytometry, FCM) е клетъчен анализатор, който измерва интензитета на флуоресценция на оцветени клетъчни маркери. Това е високотехнологична технология, разработена на базата на анализ и сортиране на единични клетки. Той може бързо да измерва и класифицира размера, вътрешната структура, ДНК, РНК, протеини, антигени и други физични или химични свойства на клетките и може да се основава на събирането на тези класификации.
Поточният цитометър се състои основно от следните пет части:
1 Поточна камера и флуидна система
2 Лазерен източник на светлина и система за оформяне на лъча
3 Оптична система
4 Електроника, система за съхранение, дисплей и анализ
5 Система за сортиране на клетки
Сред тях, лазерното възбуждане в източника на лазерна светлина и системата за формиране на лъч е основното измерване на флуоресцентни сигнали в поточната цитометрия. Интензитетът на възбуждащата светлина и времето на експозиция са свързани с интензитета на флуоресцентния сигнал. Лазерът е източник на кохерентна светлина, който може да осигури светлина с една дължина на вълната, с висок интензитет и висока стабилност. Това е идеалният източник на възбуждаща светлина, който отговаря на тези изисквания.
Между лазерния източник и проточната камера има две цилиндрични лещи. Тези лещи фокусират лазерен лъч с кръгло напречно сечение, излъчван от лазерния източник в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение (22 μm × 66 μm). Лазерната енергия в този елиптичен лъч се разпределя според нормалното разпределение, осигурявайки постоянен интензитет на осветяване за клетките, преминаващи през зоната на лазерно откриване. От друга страна, оптичната система се състои от множество набори от лещи, дупки и филтри, които могат грубо да бъдат разделени на две групи: нагоре и надолу по потока на камерата.
Оптичната система пред проточната камера се състои от леща и отвор. Основната функция на лещата и дупката (обикновено две лещи и една дупка) е да фокусират лазерния лъч с кръгло напречно сечение, излъчван от лазерния източник, в елиптичен лъч с по-малко напречно сечение. Това разпределя лазерната енергия според нормалното разпределение, осигурявайки постоянен интензитет на осветяване на клетките в зоната на лазерно откриване и минимизирайки смущенията от разсеяна светлина.
Има три основни вида филтри:
1: Дългопропускащ филтър (LPF) - пропуска само светлина с дължини на вълните, по-високи от определена стойност.
2: Късопропускащ филтър (SPF) - пропуска само светлина с дължина на вълната под определена стойност.
3: Лентов филтър (BPF) - пропуска само светлина в определен диапазон на дължина на вълната.
Различни комбинации от филтри могат да насочват флуоресцентни сигнали при различни дължини на вълната към отделни фотоумножителни тръби (PMT). Например филтрите за откриване на зелена флуоресценция (FITC) пред PMT са LPF550 и BPF525. Филтрите, използвани за откриване на оранжево-червена флуоресценция (PE) пред PMT, са LPF600 и BPF575. Филтрите за откриване на червена флуоресценция (CY5) пред PMT са LPF650 и BPF675.
Поточната цитометрия се използва главно за сортиране на клетки. С напредването на компютърните технологии, развитието на имунологията и изобретяването на технологията за моноклонални антитела, нейните приложения в биологията, медицината, фармацията и други области стават все по-широко разпространени. Тези приложения включват анализ на клетъчната динамика, клетъчна апоптоза, клетъчно типизиране, диагностика на тумори, анализ на ефикасността на лекарствата и др.
Време на публикуване: 21 септември 2023 г
